| Congresso Brasileiro de Microbiologia 2023 | Resumo: 781-1 | ||||
Resumo:A patogenicidade bacteriana é um processo complexo que envolve a expressão de diferentes componentes e estruturas celulares, como os biofilmes. Um dos mecanismos envolvidos na formação de biofilmes é a comunicação por quorum sensing (QS), que desempenha um papel fundamental na virulência de Pseudomonas aeruginosa. O uso de antibióticos é o tratamento predominante para infecções, mas com o surgimento de bactérias resistentes, existe a necessidade de desenvolver novas estratégias de tratamento. As abordagens anti-virulência, como a inibição do QS, são interessantes pois podem interromper a virulência do patógeno sem interferir no seu crescimento, supostamente impondo menor pressão seletiva sobre este e dificultando a seleção de bactérias resistentes. A inibição do QS por compostos naturais vem sendo investigada e, dentre estes compostos, os fenólicos destacam-se pela ampla representatividade e pelas propriedades bioativas. Estudos preliminares demonstraram o efeito de ácido rosmarínico, curcumina e resveratrol na inibição de fenótipos regulados por QS em P. aeruginosa, como a produção de piocianina e ramnolipídios. Este trabalho teve o objetivo de avaliar o efeito combinado de compostos fenólicos com o antibiótico tobramicina na inibição da formação de biofilmes de P. aeruginosa PAO1. Inicialmente, foi determinada a concentração inibitória mínima do antibiótico e dos fenólicos ácido rosmarínico, curcumina e resveratrol para P. aeruginosa PAO1. A interação entre os compostos foi avaliada pelo método Checkerboard em microplacas de 96 poços contendo meio de cultura Luria Bertani (LB), tobramicina (0,53 a 4,28 μM), curcumina (6 a 50 μM), resveratrol (60 a 500 μM), ácido rosmarínico (60 a 500 μM) e P. aeruginosa (1×106 UFC/mL). As placas foram incubadas a 37˚C por 24 h. Avaliou-se a formação dos biofilmes utilizando cristal violeta e os dados de absorbância foram analisados no software SynergyFinder 3.0 a fim de identificar as combinações sinérgicas para inibição do biofilme, com base nos mapas de sinergia, pontuações e matrizes-dose resposta (Figura 1). As concentrações selecionadas e suas respectivas pontuações (scores) foram 500-1,07 μM para ácido rosmarínico-tobramicina (score 14,92); 50-1,07 μM para curcumina-tobramicina (score 31,3); e 500-1,07 μM para resveratrol-tobramicina (score 14,24). Estas combinações foram utilizadas em um novo teste de formação de biofilmes, utilizando lamínulas de vidro dispostas em placas de 24 poços, coradas com cristal violeta, e observadas em microscópio ótico (Nikon eclipse Ni). As imagens obtidas revelaram a formação de um biofilme denso, compacto e com matriz fechada por P. aeruginosa PAO1 (Figura 2-A,B). Na presença apenas do antibiótico (Figura 2-C), foi possível observar a inibição parcial do biofilme, apresentando-se menos denso, com células dispersas. No entanto, os melhores resultados foram observados nos tratamentos combinados, que impediram a formação do biofilme, sendo possível visualizar células dispersas e distantes, com poucos aglomerados, principalmente no tratamento com curcumina, evidenciando o sinergismo entre os compostos (Figura 2-D,E,F). As combinações testadas revelaram-se como uma estratégia para reduzir a dose de antibiótico nos tratamentos e obter resultados satisfatórios contra a formação de biofilmes de P. aeruginosa. Os compostos fenólicos podem aumentar a sensibilidade das bactérias e são potenciais agentes para serem coadministrados com antibióticos. Palavras-chave: ácido rosmarínico, curcumina, microscopia, resveratrol, sinergismo Agência de fomento:CAPES e FoRC-FAPESP (2013/07914-8) | |||||